酵母组蛋白提取试剂盒

简要描述：产品概述 product description 贝博® BBproExtra® 酵母组蛋白提取试剂盒适用于从各种昆虫组织样本中提取组蛋白。提取过程简单方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、组蛋白修饰实验比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

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厂商性质：生产厂家
更新时间：2025-01-01
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蛋白质生物学

蛋白提取和裂解细胞器分离蛋白纯化蛋白质浓缩和缓冲液置换蛋白定量蛋白凝胶电泳免疫组织化学查看全部产品

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详细介绍

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

酵母

产品特点

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项

使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

1. 提取液制备：
每500ul蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
2. 收集酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，吸干上清，收集酵母细胞。
3. 用冷PBS洗涤酵母细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100-200mg湿重酵母细胞（或者100-200ul酵母沉淀体积）中加入250-500ul冷的酵母蛋白提取液E，充分混匀。
5. 在室温或37℃条件下于振荡30分钟-2小时。
6. 在4℃，2000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入500ul蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下轻轻振荡20-40分钟。
8. 在4℃，16000×g条件下离心15分钟，弃上清，留沉淀。
9. 沉淀中加入100ul组蛋白提取液B。
10. 用200ul枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀。
11. 置4℃冰箱过夜存放。
12. 在12000×g条件下离心10分钟，收集上清。
13. 在上清中加入10-25ul 试剂C充分混匀。
14. 加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析

1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂E和A的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用Bradford法。不适合用BCA法。

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