细菌跨膜蛋白提取试剂盒

2-8℃

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

WB,IP等

细菌

1.使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
6.本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
7.本品不含EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

WB,IP等

1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

1. 提取液制备：
每500 μl冷的提取液A中加入5 μl提取液B 和2 μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 离心收集菌体，用PBS洗菌体2次。
3. 按每100-150 mg湿重菌体样本加入500 μl冷的提取液A（大约菌体和提取液体积比1:3-1:5，淹没菌体即可），吹打混匀，在2-8℃振荡1-2小时，至菌体裂解，菌体沉淀减少。
4. 将菌液在2-8℃低温下12000×g离心5分钟，取上清。
5. 在37℃水浴10分钟。
6. 在37℃， 1000×g离心3分钟。
7. 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50 μl液体。
8. 用1-2倍体积的膜蛋白溶解液溶解该溶液，即得细菌膜蛋白样品。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

1.Yu-gang Shi, et al.
Multifunctional alkyl ferulate esters as potential food additives: Antibacterial activity and mode of action against Listeria monocytogenes and its application on American sturgeon caviar preservation
Food Control 2019 （IF=4.248）

2.Zhan Huang, et al.
Inhibitory effects and membrane damage caused to fish spoilage bacteria by cinnamon bark (Cinnamomum tamala) oil
LWT 2019 （IF=3.714）

3.XiangTang, et al.
Chromosomal expression of CadR on Pseudomonas aeruginosa for the removal of Cd(II) from aqueous solutions
Science of The Total Environment 2018 （IF=4.61）

4.Xiaolan Wang, Beibei Liu, Yafeng Dou et al.
The Riemerella anatipestifer AS87_01735 gene encodes a nicotinamidase (PncA), an important virulence factor
Applied and environmental microbiology 2016 （IF=4.077）

5.Longwen Xiao, Liang Zhou et al.
Apa is a trimeric autotransporter adhesin of Actinobacillus pleuropneumoniae responsible for autoagglutination and host cell adherence
Journal of Basic Microbiology 2011 （IF=1.585）