植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒-酶法

简要描述：产品概述 product description 贝博® BBproExtra® 植物核蛋白和细胞质蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白和其它细胞质蛋白。本试剂盒含有的配方能够有效溶解植物膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

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厂商性质：生产厂家
更新时间：2025-01-01
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蛋白质生物学

蛋白提取和裂解细胞器分离蛋白纯化蛋白质浓缩和缓冲液置换蛋白定量蛋白凝胶电泳免疫组织化学查看全部产品

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详细介绍

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

植物

产品特点

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项

使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。


使用方法

1. 提取液制备：
每500ul预冷的蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂；每200ul蛋白提取液C中分别加入1ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100-200mg新鲜植物叶片组织样本用刀或锋利的刀片剪切碎，切成0.5mm*0.5mm细块，加入500ul提取液A，充分混匀。
3. 将悬液置振荡器上室温振荡12-72小时。
4. 在1000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
5. 在沉淀中加入500ul提取液B，充分混匀。用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
6. 将匀浆液在800×g离心5分钟。
7. 收集沉淀I，将上清II移入另一干净的离心管。
8. 在沉淀I中加入100-200μl冷的提取液C，高速涡旋5秒，充分混匀。
9. 置4℃振荡20-40分钟。
10. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到核蛋白。
12. 在步骤7中的上清II中加入50ul胞质提取液D，高速涡旋振荡10秒，充分混匀。
13. 置4℃振荡10分钟。
14. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
15. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到细胞质蛋白。
16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析

1.蛋白浓度低？
植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。
处理部分样本时可能没有裂解，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂B的匀浆次数，并适当延长试剂A和C的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。

4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

参考文献

1.Binhui Zhan , Wenyang Zhao, et al.
Functional Scanning of Apple Geminivirus Proteins as Symptom Determinants and Suppressors of Posttranscriptional Gene Silencing
Viruses. 2018 （IF=3.761）

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