膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）

简要描述：产品概述 product description 贝博TM BBproExtra® 膜蛋白提取试剂盒（双向电泳用）是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。膜蛋白提取试剂盒可以从细胞组织样本中提取膜蛋白，可用于纯化膜蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。提取的蛋白样品中不含盐，可以直接用于等电聚焦、双向电泳等。如下游实验不需要直接用于等电聚焦、双向电泳，可选用贝博用于Western Blotting、普通蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验的其他试剂盒（相关产品BB-3103）。

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厂商性质：生产厂家
更新时间：2025-01-01
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CLASSIFICATION

蛋白质生物学

蛋白提取和裂解细胞器分离蛋白纯化蛋白质浓缩和缓冲液置换蛋白定量蛋白凝胶电泳免疫组织化学查看全部产品

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详细介绍

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

双向电泳

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

1、使用方便。
2、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

双向电泳

仪器准备

1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项

使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。


使用方法

1. 提取液制备：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
或者取50mg-100mg组织样本，用冷PBS洗干净，然后用刀尽可能剪碎，加400ul冷的试剂 A，用组织匀浆机/器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 洗涤后的细胞样品中加入400ul冷的试剂 A，充分混匀。
4. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。
5. 在2-8℃低温下12000g离心5分钟，取上清。
6. 在37℃水浴10分钟。
7. 在37℃， 1000g离心3分钟。
8. 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50ul液体。
9. 用50ul-200ul膜蛋白溶解液溶解该下层液体，即得膜蛋白样品。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析

1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。
处理部分组织样本时可能没有裂解，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

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